一、乾思關(guān)于PLC-PRF-5細胞細胞株的聲明

PLC-PRF-5細胞 。上海乾思生物公司細胞近3000種，來源于美國ATCC,細胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制，在大陸努力搭建正牌細胞與國內(nèi)廣大科研人員之間的溝通橋梁。為您PLC-PRF-5細胞外，還有更多相關(guān)實驗產(chǎn)品，標(biāo)準(zhǔn)品，細胞株和實驗技術(shù)服務(wù)等等前期后續(xù)服務(wù)。

  市面上的PLC-PRF-5細胞“李鬼”細胞荼毒科研，科學(xué)家指出被污染細胞系使生物醫(yī)學(xué)遭受嚴(yán)重損失，細胞的身份至關(guān)重要。

二、購買上海乾思生物PLC-PRF-5細胞注意事項--（乾思生物）發(fā)布

2.1 客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；

收到PLC-PRF-5細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責(zé)免費發(fā)送一株細胞。

2.2 如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

  注意：換液時一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細胞不適應(yīng)而造成生長不好。

2.3 細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

  （1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

  （2）凍存的細胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；

  （3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；

  （4）凍存的細胞復(fù)蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

  （5）視具體情況而定。

2.4 細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

  （1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

  （2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

  （3）細胞狀態(tài)不好，未細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

  （4）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

  （5）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

  （6）視具體情況而定。

三、原代【PLC-PRF-5細胞】培養(yǎng)之掃雷行動

錯誤1：一小管原代PLC-PRF-5細胞在水浴中解凍一段時間

糾正1：原代PLC-PRF-5細胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養(yǎng)箱中。

錯誤2：解凍match小瓶后直接離心原代PLC-PRF-5細胞

糾正2：我們不建議在解凍后離心細胞，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復(fù)原代細胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。

錯誤3：允許原代細胞變得過于融合

糾正3：當(dāng)生長至100％匯合時，原代細胞可以變得衰老。記住，原代細胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細胞的生長。我們建議在細胞達到90-95％融合時，對原代細胞進行傳代培養(yǎng)。

錯誤4：傳代原代PLC-PRF-5細胞時過度胰蛋白酶消化

糾正4：當(dāng)細胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。

錯誤5：原代PLC-PRF-5細胞可以很容易地重新凍存

糾正5：通常我們不重新凍存原代PLC-PRF-5細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓Ｔ毎浅Ｃ舾?，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細胞死亡或損傷。

錯誤6：原代PLC-PRF-5細胞可以無限的增殖

糾正6：與細胞系不同，原代PLC-PRF-5細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。

錯誤糾正后就該步入正軌啦——

應(yīng)如何進行凍存細胞的培養(yǎng)？

下列步驟以單管凍存細胞進行培養(yǎng)的實驗方案為例。

準(zhǔn)備一燒杯37°C的水。

從液氮儲存中取出一管細胞，注意保護手和眼睛。

擰松管蓋1/4圈，等待10秒鐘以釋放螺紋中可能殘留的液氮，再重新擰緊管蓋。

將凍存管的下半部分置于37°C水浴中進行解凍，直至凍存管內(nèi)僅剩余一小塊冰芯，使細胞迅速解凍。

用消毒液擦拭管體外表面，再將其移至II級A型層流細胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥中。

打開管蓋，使用1 mL移液器上下吹打細胞懸液以分散細胞。

從管中吸取20 uL細胞懸液，并將其稀釋于20 uL臺盼藍溶液中（如：Gibco?臺盼藍，貨號 15250-061）。

使用血細胞計數(shù)板來確定每毫升懸液中的活細胞數(shù)。

將管中懸液（1 mL）稀釋至產(chǎn)品說明中的濃度（例如1.25 x 10E4活細胞/毫升，Gibco? 新生人表皮角質(zhì)形成細胞）。

將5 mL細胞懸液加入25 cm2培養(yǎng)瓶，或?qū)?5 mL細胞懸浮液加入75cm2培養(yǎng)瓶中。

搖勻培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基以分散細胞。許多類型的細胞都會迅速貼壁，如果沒有在傳代后即刻搖勻細胞，細胞可能生長不均勻。

在37°C、5% CO2/95%空氣、濕度細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。為了獲得佳結(jié)果，培養(yǎng)開始后至少在24小時之內(nèi)不要擾動細胞。

是否可以對擴增后的PLC-PRF-5細胞重新凍存？如果可以該如何操作？

當(dāng)從乾思購買了凍存或正處于增殖期的細胞，可對其進行擴增和重新凍存。不過，凍存操作可能會對細胞的生長狀態(tài)有所影響。下列實驗方案為大家提供了一份培養(yǎng)基凍存細胞的基礎(chǔ)指南。

請注意：由于凍存設(shè)備與個人技術(shù)之間的差異，我們無法確保使用本方案凍存的細胞在復(fù)蘇后能夠保持活力，我們也無法為研究用戶實驗室凍存細胞的效果進行擔(dān)保。

使用37°C水浴化凍培養(yǎng)基或4°C條件下過一個晚上進行化凍。

如果在水浴中進行化凍，請確保溫度不要過37°C，也勿將該產(chǎn)品延長時間置于37°C。

培養(yǎng)基在使用前應(yīng)置于4°C條件下平衡。為獲得優(yōu)結(jié)果，大家使用能夠控制變溫速率的冰箱。如果缺少能夠控制變溫速率的冰箱，也可使用細胞凍存盒。

如需用酶試劑解離培養(yǎng)器皿表面的細胞，則需使用對應(yīng)的終止溶液重懸細胞以中和酶的效果。

通過離心沉淀PLC-PRF-5細胞。

去除上清液后，使用預(yù)冷的培養(yǎng)基以5x10E5至3x10E6細胞/毫升的密度重懸細胞。

將細胞懸液分裝至合適數(shù)量的凍存管中。

將細胞盡快冷卻至4°C。

如果使用控制變溫速率的冰箱：以每分鐘降低1°C的速率冰凍樣品，直至–40°C。之后按照每分鐘降低2°C的速率降至–90°C左右。

如果使用細胞凍存盒：請按照說明書來準(zhǔn)備凍存盒。

為獲得佳結(jié)果，大家在細胞溫度降至–80°C后，盡快將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮儲存設(shè)備的氣相中。

作為培養(yǎng)基的替代品，可使用該凍存細胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清（FBS）和10% DMSO進行細胞凍存。請注意不將培養(yǎng)基用于人表皮黑素細胞的凍存操作。

乾思生物科技實驗室溫馨提醒：

組織塊貼壁法分離細胞時：注意組織塊貼壁2-3h后，補液時沿壁輕輕加入培養(yǎng)基，防止組織塊漂浮。

關(guān)于細胞培養(yǎng)還有很多問題需要解答，怎么辦？

歡迎咨詢，為你排憂解難！

四、PLC-PRF-5細胞售后服務(wù)政策

  Acris、 abcam、cst、Biorbyt、santa、Novus、sigma、lifespan、NEB、roche、ABI、R&D millipore、BD、Qiagen Cayman、Jackson Life、GeneTex、Bio-Rad DSHB、tocris、peprotech 等；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，低比價，另常備、Trizol、DMSO、lipo2000、lipo3000、SC-2004、SC-2005常備現(xiàn)貨 ；貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。

  PLC-PRF-5細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果；細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，我們調(diào)查核實后予免費調(diào)換，不收取任何費用。

  需要客戶PLC-PRF-5細胞細胞培養(yǎng)說明、細胞操作處理方法、細胞質(zhì)量問題反饋表。

  如用戶收到細胞8-30天之內(nèi)，因處理不當(dāng)造成細胞死亡或污染，我公司將優(yōu)惠價重新一株原細胞

  PLC-PRF-5細胞質(zhì)量可靠，售后有保障

  我?guī)旒毎?000種，來源于美國ATCC,細胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制。

  凍存細胞時間為5-7個工作日，活細胞為7-15個工作日。

  由于細胞庫現(xiàn)有細胞類目多，為了不出現(xiàn)混亂錯誤，需要了解PLC-PRF-5細胞相關(guān)細胞價格及詳細資料請老師告訴我們，對您造成的不便還請見諒！

  （BY WHY）