一、乾思關(guān)于PLC-PRF-5細(xì)胞細(xì)胞株的聲明

PLC-PRF-5細(xì)胞 。上海乾思生物公司細(xì)胞近3000種，來(lái)源于美國(guó)ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)量控制，在大陸努力搭建正牌細(xì)胞與國(guó)內(nèi)廣大科研人員之間的溝通橋梁。為您PLC-PRF-5細(xì)胞外，還有更多相關(guān)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品，標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)等等前期后續(xù)服務(wù)。

  市面上的PLC-PRF-5細(xì)胞“李鬼”細(xì)胞荼毒科研，科學(xué)家指出被污染細(xì)胞系使生物醫(yī)學(xué)遭受?chē)?yán)重?fù)p失，細(xì)胞的身份至關(guān)重要。

二、購(gòu)買(mǎi)上海乾思生物PLC-PRF-5細(xì)胞注意事項(xiàng)--（乾思生物）發(fā)布

2.1 客戶(hù)收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；

收到PLC-PRF-5細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。

2.2 如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

  注意：換液時(shí)一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。

2.3 細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

  （1）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

  （2）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；

  （3）存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；

  （4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

  （5）視具體情況而定。

2.4 細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

  （1）客戶(hù)造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

  （2）客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

  （3）細(xì)胞狀態(tài)不好，未細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

  （4）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

  （5）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

  （6）視具體情況而定。

三、原代【PLC-PRF-5細(xì)胞】培養(yǎng)之掃雷行動(dòng)

錯(cuò)誤1：一小管原代PLC-PRF-5細(xì)胞在水浴中解凍一段時(shí)間

糾正1：原代PLC-PRF-5細(xì)胞對(duì)解凍過(guò)程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無(wú)菌操作臺(tái)。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細(xì)胞，并置于培養(yǎng)箱中。

錯(cuò)誤2：解凍match小瓶后直接離心原代PLC-PRF-5細(xì)胞

糾正2：我們不建議在解凍后離心細(xì)胞，因?yàn)殡x心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。

錯(cuò)誤3：允許原代細(xì)胞變得過(guò)于融合

糾正3：當(dāng)生長(zhǎng)至100％匯合時(shí)，原代細(xì)胞可以變得衰老。記住，原代細(xì)胞不是100％純，因此重要的是盡量減少污染細(xì)胞的生長(zhǎng)。我們建議在細(xì)胞達(dá)到90-95％融合時(shí)，對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

錯(cuò)誤4：傳代原代PLC-PRF-5細(xì)胞時(shí)過(guò)度胰蛋白酶消化

糾正4：當(dāng)細(xì)胞傳代時(shí)，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細(xì)胞中的胰酶，因?yàn)槿魏位钚缘囊鹊鞍酌付紝p傷細(xì)胞。

錯(cuò)誤5：原代PLC-PRF-5細(xì)胞可以很容易地重新凍存

糾正5：通常我們不重新凍存原代PLC-PRF-5細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。

錯(cuò)誤6：原代PLC-PRF-5細(xì)胞可以無(wú)限的增殖

糾正6：與細(xì)胞系不同，原代PLC-PRF-5細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細(xì)胞類(lèi)型，你應(yīng)該密切監(jiān)測(cè)細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可能隨著時(shí)間的推移，大量生長(zhǎng)從而成為主要細(xì)胞。

錯(cuò)誤糾正后就該步入正軌啦——

應(yīng)如何進(jìn)行凍存細(xì)胞的培養(yǎng)？

下列步驟以單管凍存細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)方案為例。

準(zhǔn)備一燒杯37°C的水。

從液氮儲(chǔ)存中取出一管細(xì)胞，注意保護(hù)手和眼睛。

擰松管蓋1/4圈，等待10秒鐘以釋放螺紋中可能殘留的液氮，再重新擰緊管蓋。

將凍存管的下半部分置于37°C水浴中進(jìn)行解凍，直至凍存管內(nèi)僅剩余一小塊冰芯，使細(xì)胞迅速解凍。

用消毒液擦拭管體外表面，再將其移至II級(jí)A型層流細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng)櫥中。

打開(kāi)管蓋，使用1 mL移液器上下吹打細(xì)胞懸液以分散細(xì)胞。

從管中吸取20 uL細(xì)胞懸液，并將其稀釋于20 uL臺(tái)盼藍(lán)溶液中（如：Gibco?臺(tái)盼藍(lán)，貨號(hào) 15250-061）。

使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板來(lái)確定每毫升懸液中的活細(xì)胞數(shù)。

將管中懸液（1 mL）稀釋至產(chǎn)品說(shuō)明中的濃度（例如1.25 x 10E4活細(xì)胞/毫升，Gibco? 新生人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞）。

將5 mL細(xì)胞懸液加入25 cm2培養(yǎng)瓶，或?qū)?5 mL細(xì)胞懸浮液加入75cm2培養(yǎng)瓶中。

搖勻培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基以分散細(xì)胞。許多類(lèi)型的細(xì)胞都會(huì)迅速貼壁，如果沒(méi)有在傳代后即刻搖勻細(xì)胞，細(xì)胞可能生長(zhǎng)不均勻。

在37°C、5% CO2/95%空氣、濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。為了獲得佳結(jié)果，培養(yǎng)開(kāi)始后至少在24小時(shí)之內(nèi)不要擾動(dòng)細(xì)胞。

是否可以對(duì)擴(kuò)增后的PLC-PRF-5細(xì)胞重新凍存？如果可以該如何操作？

當(dāng)從乾思購(gòu)買(mǎi)了凍存或正處于增殖期的細(xì)胞，可對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增和重新凍存。不過(guò)，凍存操作可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)有所影響。下列實(shí)驗(yàn)方案為大家提供了一份培養(yǎng)基凍存細(xì)胞的基礎(chǔ)指南。

請(qǐng)注意：由于凍存設(shè)備與個(gè)人技術(shù)之間的差異，我們無(wú)法確保使用本方案凍存的細(xì)胞在復(fù)蘇后能夠保持活力，我們也無(wú)法為研究用戶(hù)實(shí)驗(yàn)室凍存細(xì)胞的效果進(jìn)行擔(dān)保。

使用37°C水浴化凍培養(yǎng)基或4°C條件下過(guò)一個(gè)晚上進(jìn)行化凍。

如果在水浴中進(jìn)行化凍，請(qǐng)確保溫度不要過(guò)37°C，也勿將該產(chǎn)品延長(zhǎng)時(shí)間置于37°C。

培養(yǎng)基在使用前應(yīng)置于4°C條件下平衡。為獲得優(yōu)結(jié)果，大家使用能夠控制變溫速率的冰箱。如果缺少能夠控制變溫速率的冰箱，也可使用細(xì)胞凍存盒。

如需用酶試劑解離培養(yǎng)器皿表面的細(xì)胞，則需使用對(duì)應(yīng)的終止溶液重懸細(xì)胞以中和酶的效果。

通過(guò)離心沉淀PLC-PRF-5細(xì)胞。

去除上清液后，使用預(yù)冷的培養(yǎng)基以5x10E5至3x10E6細(xì)胞/毫升的密度重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞懸液分裝至合適數(shù)量的凍存管中。

將細(xì)胞盡快冷卻至4°C。

如果使用控制變溫速率的冰箱：以每分鐘降低1°C的速率冰凍樣品，直至–40°C。之后按照每分鐘降低2°C的速率降至–90°C左右。

如果使用細(xì)胞凍存盒：請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)來(lái)準(zhǔn)備凍存盒。

為獲得佳結(jié)果，大家在細(xì)胞溫度降至–80°C后，盡快將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮儲(chǔ)存設(shè)備的氣相中。

作為培養(yǎng)基的替代品，可使用該凍存細(xì)胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清（FBS）和10% DMSO進(jìn)行細(xì)胞凍存。請(qǐng)注意不將培養(yǎng)基用于人表皮黑素細(xì)胞的凍存操作。

乾思生物科技實(shí)驗(yàn)室溫馨提醒：

組織塊貼壁法分離細(xì)胞時(shí)：注意組織塊貼壁2-3h后，補(bǔ)液時(shí)沿壁輕輕加入培養(yǎng)基，防止組織塊漂浮。

關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)還有很多問(wèn)題需要解答，怎么辦？

歡迎咨詢(xún)，為你排憂(yōu)解難！

四、PLC-PRF-5細(xì)胞售后服務(wù)政策

  Acris、 abcam、cst、Biorbyt、santa、Novus、sigma、lifespan、NEB、roche、ABI、R&D millipore、BD、Qiagen Cayman、Jackson Life、GeneTex、Bio-Rad DSHB、tocris、peprotech 等；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，低比價(jià)，另常備、Trizol、DMSO、lipo2000、lipo3000、SC-2004、SC-2005常備現(xiàn)貨 ；貨期短，價(jià)格優(yōu)，售后齊全。

  PLC-PRF-5細(xì)胞污染問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們調(diào)查核實(shí)后予免費(fèi)調(diào)換，不收取任何費(fèi)用。

  需要客戶(hù)PLC-PRF-5細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明、細(xì)胞操作處理方法、細(xì)胞質(zhì)量問(wèn)題反饋表。

  如用戶(hù)收到細(xì)胞8-30天之內(nèi)，因處理不當(dāng)造成細(xì)胞死亡或污染，我公司將優(yōu)惠價(jià)重新一株原細(xì)胞

  PLC-PRF-5細(xì)胞質(zhì)量可靠，售后有保障

  我?guī)旒?xì)胞近3000種，來(lái)源于美國(guó)ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)量控制。

  凍存細(xì)胞時(shí)間為5-7個(gè)工作日，活細(xì)胞為7-15個(gè)工作日。

  由于細(xì)胞庫(kù)現(xiàn)有細(xì)胞類(lèi)目多，為了不出現(xiàn)混亂錯(cuò)誤，需要了解PLC-PRF-5細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞價(jià)格及詳細(xì)資料請(qǐng)老師告訴我們，對(duì)您造成的不便還請(qǐng)見(jiàn)諒！

  （BY WHY）