方法

概念

優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)

適用場(chǎng)景

直接法

讓酶偶聯(lián)會(huì)在表面結(jié)合抗原的抗體。

實(shí)驗(yàn)步驟少，可簡(jiǎn)化試驗(yàn)。

1.需要制備在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中用來(lái)檢測(cè)的各種偶聯(lián)抗體。

2.包被抗原會(huì)非特異性地結(jié)合表面，因此他可能會(huì)在非天然結(jié)構(gòu)中被呈遞給抗體從而導(dǎo)致更強(qiáng)的背景信號(hào)。

1.適合測(cè)定樣品中的抗體量，比如感染后的血清抗體水平；2.不適合多種抗體的分析。

間接法

類似于直接ELISA，但不偶聯(lián)抗體。使用第二偶聯(lián)抗體來(lái)檢測(cè)結(jié)合的抗體。

1.在所有不同的實(shí)驗(yàn)中使用相同物種的結(jié)合抗體的情況下，可以使用偶聯(lián)的第二抗體來(lái)進(jìn)行多個(gè)實(shí)驗(yàn)。

2. 由于二抗一般分為多抗，因此，一個(gè)一抗分子上可以結(jié)合多個(gè)二抗分子。同時(shí)，一個(gè)二抗分子上可以標(biāo)記多個(gè)酶分子，所以當(dāng)待測(cè)抗體為多抗時(shí)，信號(hào)經(jīng)過(guò)兩步放大，*終提高了檢測(cè)的靈敏度。

3.由于二抗制備比較容易，而且很早就開始商品化，所以操作者無(wú)需將一抗進(jìn)行酶標(biāo)，大大縮減了工作量。

1.實(shí)驗(yàn)步驟耗時(shí)更長(zhǎng)，更容易出錯(cuò)。

2.會(huì)有更強(qiáng)的背景信號(hào)，因?yàn)樗璧脑噭?shù)量更多，每一種都可能會(huì)出現(xiàn)非特異性結(jié)合。

1.檢測(cè)抗體的效價(jià)，血清的效價(jià)以及單克隆抗體的篩選。

2.檢測(cè)標(biāo)志性抗體。

直接夾心法

直接將抗原固定在固相上。

更具有特異性。

需要開發(fā)適合實(shí)驗(yàn)的“匹配組”抗體，費(fèi)錢且耗時(shí)。

只能用于識(shí)別具有兩個(gè)或兩個(gè)以上標(biāo)位的抗體。

間接夾心法

將捕獲抗體固定在固相上以捕獲抗原。

1.進(jìn)一步放大了信號(hào)，提高了靈敏性。

2.由于酶標(biāo)二抗僅能識(shí)別檢測(cè)抗體，提高了體系的特異性。

配置“實(shí)驗(yàn)組”費(fèi)錢且耗時(shí)。

只能用于識(shí)別具有兩個(gè)或兩個(gè)以上標(biāo)位的抗體。

競(jìng)爭(zhēng)法

讓抗體競(jìng)爭(zhēng)性的或抑制抗體結(jié)合實(shí)測(cè)數(shù)量的抗原來(lái)進(jìn)行定量。

檢測(cè)速度快。

需要較多量的酶標(biāo)記抗原。

只有一個(gè)結(jié)合部位的抗原，對(duì)小分子抗原如激素和藥物等的測(cè)定常用這種方法。